血站核酸扩增查验试验 室技能查验要求及流程 湖南省临床查验中心 吕岳峰 1 一、核酸扩增查验技能及其查验意图 ? 核酸扩增查验技能指以扩增检测DNA或RNA为 办法的检测技能，以聚合酶链反响 （Polymerase Chain Reaction、 PCR）运用 最广。 ? 实施查验的意图 规范核酸扩增查验项目技能的 运用，确保临床用血安全。 2 二、国家关于展开核酸扩增试验的法规 1、卫生部《临床基因扩增查验试验室办理办法》（卫医 发[2010]194号）。 2、卫生部临床查验中心2010年《临床基因扩增查验试验 室作业规范》。 3、国家卫生和计划生育委员会印发《全面推动血站核酸 检测作业实施方案（2013-2015年）》（卫计生发 [2013]22号）。 现在国家对采供血安排核酸扩增查验技能的运用尚没有出 台专门的办理办法，故对血站核酸扩增查验试验室的办理 包含查验依照上述文件要求进行。 3 ? ? ? 三、查验的主要内容 ? 1、对人员的要求 ? 从事核酸扩增查验试验室技能人员有必要进 行上岗训练，经训练合格者方可从事基因 扩增查验作业。 训练及合格证发放单位 现在为卫生行 政办理部分授权的卫生部临床查验中心。 4 2、对试验室分区的要求 ? ? ? ? ? 试验室原则上应分为四个区，但如运用核酸主动提取和 （或）全主动扩增检测仪，区域可相应削减。要注意的是： 1）每一区域都须有专用的仪器设备，各区域都有必要有明 确的符号，以防止设备物品如加样器等从其各自的区域内 移出然后形成不同的作业区域间设备物品混杂。 2）进入各个作业区域有必要严厉遵从单一方向次序，即只 能从试剂贮存和预备区向标本制备区、扩增区、产品剖析 区活动，以防止产生穿插污染。 3）在不同的作业区域应运用不同色彩或有显着差异标志 的作业服，以便于辨别。 4）此外，当作业者脱离作业区时，不得将各区特定的工 作服带出。 5 抱负的核酸扩增查验试验室分区布局示意图 6 3、对仪器设备的要求 ? 试验室应按分区装备展开核酸扩增检测所 需的一切仪器设备。确保核酸扩增查验的 有关要求得到满意。 7 1）试剂预备区用处及必备仪器设备 ? ? ? ? ? ? ? ? （1）用处：贮存试剂、试剂分装等。 （2）必备仪器设备 A、2-8 ℃和-20 ℃（-40 ℃）冰箱 B、混匀器 C、微量加样器（掩盖1-1000ul） D、移动紫外灯（近作业台面运用） E、耗材：一次性手套、试管和TIP头（带滤芯） F、专用作业服和作业鞋及专用办公用品等 8 2)标本制备区用处及必备仪器设备 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? （1）用处：标本保存和核酸提取、贮存及其加至扩增反 应管和测定RNA时cDNA的组成。 （2）必备仪器设备 A、2-8℃冰箱、-20 ℃或-80 ℃冰箱 B、台式冷冻离心机 C、混匀器 D、核酸提取仪 E、微量加样器（掩盖1-1000ul） F、可移动紫外灯（近作业台面运用） G、生物安全柜 H、耗材：一次性手套、试管和TIP头（带滤芯） J、专用作业服和作业鞋及专用办公用品等 9 3)扩增区的用处及必备仪器设备 ? ? ? ? ? ? ? （1）用处：DNA或cDNA扩增。此外，已制备的DNA模 板和组成的cDNA(来自样本制备区)的参加和主反响混合 液(来自试剂贮存和制备区)制备成反响混合液等也可在本 区内进行。 （2）必备仪器设备 A、核酸扩增仪 B、微量加样器（掩盖1-1000ul） C、可移动紫外灯（近作业台面用） D、消耗品：一次性手套 E、专用作业服和作业鞋及专用办公用品等 10 4)扩增产品剖析区 ? ? ? ? ? ? ? ? （1）用处：用于扩增产品剖析，如HBV、HCV、HIV等 的分型、DNA序列剖析等。 （2）仪器设备 视查验办法不同而定。根本仪器设备如下： A、微量加样器（掩盖1-1000ul） B、可移动紫外灯（近作业台面运用） C、消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、加样器吸头 （带滤芯） D、专用作业服和作业鞋 E、专用办公用品 F、电泳仪、酶标仪、测序仪等 11 4、对质量系统树立的要求 试验室应树立展开核酸扩增检测所需的质量 系统并经试运转，质量系统包含以下内容： 1)质量手册 2)质量系统程序文件 3)规范操作程序 各种记载作为支撑文件 12 四、查验流程及其办法 ? ? ? ? ? 1、流程 拟展开血液核酸扩增查验试验的采供血安排按要 求筹建好试验室（前述各种软硬件设备设备、质 量系统、人员训练等等） 通过必定时刻（半年左右）对核酸扩增查验质量 系统的预运转和改善 由单位法定代表人向省卫生行政主管部分提出版 面请求【附试验室平面图、质量系统文件、人员 资质、检测成果（含有阴性阳性试验成果至少各 一例）等支撑文件）】等等 省卫生行政主管部分收到请求后先进行预审，预 审通往后即安排专家组到现场评定查验。 13 2、现场评定查验的内容 ? ? ? ? ? 主要是依照国家对展开核酸扩增查验的规则和要求，对被 查验单位核酸查验试验室的软硬件树立状况、质量系统建 立及其运转状况进行现场查看和点评，还包含对人员的考 核考试环节，如： 1）场所分区，硬件装备。 2）人员上岗证，人员及仪器档案树立文件，仪器及设备配 备，特别仪器设备如扩增仪、温度计、加样枪等的校准， 试剂、耗材质检等。 3）剖析前中后质量操控，如标本收集运送贮存查验，室内 质控，室间质评，成果陈述，客户反应，质量系统改善等 等状况。 4）现场书面考试或面试内容，主要是对作业人员把握核酸扩增 查验理论和质量系统运转状况，以及检测才干进行查核。 14 五、监督办理 ? ? 1、评定查验合格的单位才干正式展开核酸扩 增查验试验，由省卫生行政主管部分发放合格 证，不然视为违规执业。 2、查验通往后的监管 省卫生行政主管部分及 其授权的质量办理部分对展开核酸